摘要：采用枫澜二氧化氯和市面一款二氧化氯泡腾片，作为本实验的消毒剂试剂，探索不同样品在不同浓度和不同处理时间下，对养殖鱼类致病菌嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）和副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）的抑菌作用。实验证明，枫澜二氧化氯制剂对嗜水气单胞菌和副溶血弧菌在相同的实验条件下，抑菌效果优于竞品，且在0.3mg/L浓度处理5min时，依旧有较好的杀菌率，说明池塘推荐用量在100~200g/亩·米时，是有效的。
关键词：二氧化氯 嗜水气单胞菌 副溶血弧菌 抑菌作用
作为一款广谱、高效的消毒剂，二氧化氯在水产养殖中的应用越来越广泛。区别于漂白粉、二氯异氰尿酸钠、强氯精，二氧化氯不产生有机氯等毒害副产物，其不受池塘酸碱度影响、抑菌效果快、能力强的特点，受到行业越来越多的关注。
但由于二氧化氯并没有稳定且标准化的质量检测方法，不具备兽药的基本条件。因此，作为水产投入品进入养殖过程中，没有国家标准来衡量，也就造成市面上此类产品质量良莠不齐。
本实验选取枫澜二氧化氯和市面同类竞品，探索其在不同浓度和不同处理时间，对嗜水气单胞菌和副溶血弧菌的抑菌作用。以期为养殖户在选用二氧化氯消毒抑菌时，提供一定的参考。
1.实验方法
1.1实验菌株培养
将嗜水气单胞菌和副溶血弧菌接种于培养基上，置于37℃培恒温培养箱中培养8-18h，用灭菌生理盐水将致病菌浓度调节成108cfu/mL，置于低温条件下，备用。
1.2不同试剂浓度的配制
将枫澜二氧化氯及购买的竞品，在临用前打开包袋袋并准确称量二氧化氯颗粒，分别将其添加在盛有灭菌蒸馏水的容量瓶中，将其配制成浓度为3g/L的二氧化氯溶液，作为二氧化氯原液使用。准确吸取原液，配制成300mg/L、150mg/L和30mg/L浓度的二氧化氯溶液待用。
1.3杀菌处理
将盛有98mL灭菌水的三角瓶，置于37℃的恒温水浴锅內，向每个玻璃三角瓶中分别添加1mL浓度为108cfu/mL的活菌液，轻摇三角瓶使菌液分布均匀。吸取1mL不同浓度的二氧化氯溶液，轻摇三角瓶，使菌体和二氧化氯溶液均匀地分布，使其最终浓度为30mg/L、3mg/L、1.5mg/L和0.3mg/L。另外分别设置不添加二氧化氯溶液的三角瓶作为对照组。测定二氧化氯处理5min、10min和30min后的杀菌效果。
1.4杀菌效果的检测
在无菌条件下，从各三角瓶中取0.1 mL样液，涂于平板上，在37℃条件下培养48h后，计数各平板中的菌落数量，计算各组二氧化氯溶液杀菌效果。
杀菌率=（1-平板菌落数/空白对照菌落数）×100%
2.结果
2.1二氧化氯对嗜水气单胞菌的抑制作用
在0.3mg/L浓度（池塘用量200g/亩·米），处理5min、10min和30min，以及1.5mg/L处理5min时，枫澜二氧化氯对嗜水气单胞菌的杀菌作用明显优于竞品。且在0.3mg/L时，处理30min的杀菌效果优于处理10min和处理5min，杀菌率已达100%。
▲图1 不同二氧化氯在不同浓度和处理时间对嗜水气单胞菌的杀菌率
2.2二氧化氯对副溶血弧菌的抑制作用
在0.3mg/L（池塘用量200g/亩·米）、1.5mg/L、3mg/L浓度，处理5min、10min和30min时，枫澜二氧化氯对副溶血弧菌的杀菌作用明显优于竞品；且在0.3mg/L时，处理30min的杀菌效果优于处理10min和处理5min。
▲图2 不同二氧化氯在不同浓度和处理时间对副溶血弧菌的杀菌率
3.讨论
在此实验中，我们发现，枫澜二氧化氯对嗜水气单胞菌和副溶血弧菌的杀菌作用明显优于竞品；且在0.3mg/L（池塘用量200g/亩·米）浓度时，枫澜二氧化氯依旧对嗜水气单胞菌和副溶血弧菌有明显的抑制作用。
这就表明我们在推荐池塘用量为100-200g/亩·米时，对致病菌嗜水气单胞菌和副溶血弧菌是有抑制作用的。
与此同时，我们还尝试用另一种方法来评估不同二氧化氯样品在不同浓度梯度下的抑菌作用。将二氧化氯配制成浓度梯度为0.2mg/L、0.4mg/L、2mg/L、4mg/L、10mg/L 、20mg/L、50mg/L、100mg/L、250mg/L、500mg/L、1000mg/L、2000mg/L的溶液，加入到均匀涂有1mL浓度为108cfu/mL的嗜水气单胞菌平板上，在37℃条件下培养48 h后，记录抑菌圈的大小。
▲图3 2000mg/L浓度的二氧化氯对嗜水气单胞菌的抑菌效果（A：枫澜；B：市面同类产品）
本实验表明，0.2mg/L、0.4mg/L、2 mg/L、4mg/L 、10mg/L 、20mg/L、50 mg/L、100mg/L、250mg/L、500mg/L、1000mg/L浓度的二氧化氯对嗜水气单胞菌未见明显的抑菌圈。
而在浓度为2000mg/L的条件下，枫澜二氧化氯相对于竞品，对嗜水气单胞菌有了明显的抑菌圈。2000mg/L约等于池塘用量1.3kg/亩·米，而在实际生产养殖中，我们很少会用到如此高浓度的二氧化氯对池塘进行消毒、抑菌、改底等。
因此我们在考虑用二氧化氯进行抑菌实验对比的时候，也需要考虑其操作方法，使用牛津杯抑菌的方法是不行的，这可能与二氧化氯的渗透性较差有关。对比上述两种方法，消毒剂杀菌实验更适宜用于二氧化氯效果的评价。
4.总结
一直以来，池塘消毒似乎就是个伪命题，一方面觉得池塘在致病菌种类和浓度未知的情况下，使用说明书用量的消毒剂是否能够对致病菌有杀菌作用，这是无法标准衡量的；另一方面从实验室实验情况看来，消毒剂对一定种类和浓度的致病菌是有杀菌作用的。
养殖终端在使用消毒剂杀菌的初衷在于杀灭掉所有的致病菌，但实际生产中，消毒剂往往在杀灭部分致病菌后，在重新调节池塘生态系统中发挥功效。因此，使用二氧化氯对池塘进行消毒，是可行的。
通过本实验的结果来看，市面上销售的二氧化氯产品性能是不同的，枫澜二氧化氯的杀菌作用优于竞品。因此，养殖终端在选择二氧化氯制剂时，可将此抑菌实验结果作为参考购买。